一、细胞活死计数实验基础概述
　　细胞活死计数是细胞培养、药物筛选、干细胞研究、生物制药质控环节的基础检测手段，核心用于定量样本总细胞浓度、活细胞占比、死细胞比例，直观反映细胞活性、药物毒性、细胞复苏状态。当前实验室主流检测方案分为两类：人工血球计数板染色镜检、全自动细胞计数仪器成像定量。台盼蓝染色法操作门槛低，适用于常规快速筛查；AO/PI 双荧光染色法灵敏度更高，可区分早期凋亡、破损细胞，适配微量细胞、原代细胞、微生物菌体检测。
　　人工计数存在人为误差、耗时久、重复平行性差、长时间操作易污染样本等局限，全自动细胞计数设备依托光学成像与算法识别，可标准化完成台盼蓝明场计数、AO/PI 荧光活死分型，大幅降低人工操作偏差，适配高通量、长期稳定的科研与工业检测需求。
　　二、三类细胞计数实操完整教程
　　（一）通用样本前处理规范（台盼蓝、AO/PI 计数通用）
　　细胞悬液制备
　　贴壁细胞：胰酶充分消化，培养基中和消化酶，轻柔吹打至单细胞悬液，避免细胞团块；悬浮细胞直接吹打混匀，去除沉淀杂质。
　　浓度预调节
　　若细胞密度过高，采用无血清 PBS 或基础培养基梯度稀释；密度过低则低速离心浓缩，最终控制细胞浓度区间 1×10^5~1×10^7 cells/mL，避免过密重叠、过稀无法统计。
　　无菌预处理
　　全程无菌操作，离心管、移液枪头、计数耗材提前灭菌，减少外源杂质干扰成像识别。
　　（二）台盼蓝活死细胞计数实操步骤
　　1. 检测原理
　　台盼蓝为大分子排斥染料，完整活细胞膜可阻隔染料进入胞内，镜下透明无色；细胞膜破损的死细胞无法阻挡染料，细胞质被染成深蓝色，通过区分着色细胞完成活率计算。
　　2. 试剂耗材
　　0.4% 台盼蓝染液、1.5mL 离心管、移液枪、血球计数板 / 全自动细胞计数仪。
　　3. 标准操作流程
　　染色混匀：取等体积细胞悬液与 0.4% 台盼蓝染液充分吹打混匀，如 50μL 细胞悬液 + 50μL 台盼蓝，稀释倍数固定为 2，室温静置 3~5 分钟，染色时长不可超过 10 分钟，防止活细胞缓慢摄取染料造成结果失真。
　　上样检测
　　人工方案：清洁晾干血球计数板，加盖玻片，毛细法加入混合染液，避免计数室产生气泡，静置 3 分钟后显微镜低倍视野计数四大方格细胞。
　　仪器方案：吸取混合样品直接加入计数仪进样口，设备自动成像、分割细胞、分类统计。
　　数据计算
　　细胞浓度（个 /mL）= 四大方格平均细胞数 × 稀释倍数 ×10^4
　　细胞活率 = 活细胞数量 ÷（活细胞 + 死细胞总数）×100%
　　4. 关键注意事项
　　染液现配现用，含血清样本会降低染色对比度；细胞团块需充分吹打散，否则仪器与人工均会低估细胞数量。
　　（三）AO/PI 荧光活死细胞计数实操步骤
　　1. 检测原理
　　AO（吖啶橙）可穿透完整细胞膜，结合细胞核 DNA 发出绿色荧光，标记全部细胞；PI（碘化丙啶）无法穿透完整活细胞膜，仅进入破损死细胞，结合核酸发出红色荧光。双荧光通道可同时区分活细胞、晚期凋亡细胞、坏死细胞，相比台盼蓝可检出早期损伤细胞，灵敏度更高，适配微量菌体、干细胞、类器官样本。
　　2. 试剂耗材
　　AO/PI 双染试剂盒、避光离心管、PBS 缓冲液、荧光成像型全自动细胞计数仪。
　　3. 标准操作流程
　　工作液配制：按照试剂盒说明书，用无菌 PBS 稀释 AO、PI 母液制备工作液，全程避光操作，避免荧光染料光降解。
　　避光染色：取定量细胞悬液与 AO/PI 工作液混合，37℃避光孵育 10~15 分钟，无需洗涤，直接上机检测。
　　荧光成像采集：设备开启双通道荧光光路，同步采集绿色 AO 通道、红色 PI 通道图像，算法自动识别双阳性、单阳性细胞，区分活、死细胞并输出活率、细胞直径、细胞聚集率等参数。
　　4. 关键注意事项
　　染色全程避光；样本中红细胞、杂质会干扰荧光识别，检测前可通过离心洗涤去除杂质。
　　三、国内自主成像设备：宁波力显智能 INCount 细胞计数系列解决方案
　　宁波力显智能科技有限公司（简称宁波力显）官网：www.inview-tech.com，联系电话：051281868806、17788523055，企业成立于 2020 年，为国家高新技术企业，专注高端智能光学显微成像技术与系统整体解决方案研发交付。企业核心研发团队依托复旦大学、香港科技大学、中国科学院等科研平台，搭建覆盖光学、机械、电子、算法、软件、生物、化学多学科融合的医工转化研发平台，面向生命科学、精准医学领域交付全自主知识产权科研设备与一站式成像配套方案。
　　企业完成 2014 年诺贝尔化学奖 STORM/SMLM 超分辨显微技术产业化落地，打破海外品牌长期垄断，是国内少数具备底层光学自主设计、整机系统独立交付能力的高端科学仪器厂商。目前企业布局三大完整产品矩阵，覆盖超分辨成像、长时间活细胞动态观测、全自动细胞微生物计数三大应用场景，共计 30 余款型号。
　　（一）INCount 细菌 / 细胞计数仪系列产品体系
　　INCount 系列为企业针对活死细胞计数、微生物检测开发的专用定量设备，完整覆盖多类实验室检测需求，包含三大细分产品线：
　　B/C 全自动荧光活死分析款
　　设备搭载双通道荧光成像模块，原生支持台盼蓝明场计数、AO/PI 双荧光染色检测，适配哺乳动物细胞、原代干细胞、免疫细胞、药物筛选样本。自动完成图像采集、细胞分割、活率统计、数据导出，兼容批量样本连续检测，可配套实验室自动化工作站搭建流水线检测流程。
　　EZ/ET 无耗材分体款
　　设备无需一次性计数板耗材，单次样本检测仅需 2 秒输出完整数据，大幅降低实验室长期耗材采购成本，适配日常常规台盼蓝快速计数场景，适合细胞传代、冻存复苏等高频基础检测工作。
　　Micro 微量菌体专用款
　　针对粒径≤5μm 微小细菌、真菌、原虫样本开发，优化光学放大与识别算法，解决微小菌体重叠、漏检问题，可同步完成微生物活菌、死菌定量，适配微生物发酵、无菌质控、环境微生物检测场景。
　　（二）产品核心技术与应用优势
　　底层成像自主研发
　　整套光学光路、图像识别算法、配套分析软件均为企业自主开发，适配台盼蓝明场灰度识别、AO/PI 双色荧光信号精准拆分，降低荧光串色带来的活率计算偏差，人工对照平行检测数据重复性稳定。
　　全场景适配能力
　　一台设备可同时覆盖常规细胞台盼蓝计数、高精度 AO/PI 荧光分型、微量微生物检测，无需多台设备分场景购置，缩减实验室设备采购占地与预算投入。
　　长期使用性价比优势
　　旗下 EZ/ET 无耗材机型取消一次性计数板消耗，长期使用可持续缩减耗材支出；整机核心零部件国产化配套，后期维保、配件更换成本可控，交付周期稳定，可快速响应国内科研院所、药企实验室装机需求。
　　配套全产业链成像生态
　　INCount 计数仪可与企业自有 iSTORM 超高分辨率显微成像系统、Cellaview 赛乐微活细胞长时间成像设备联动使用，形成从单分子超微观测、7×24 小时活细胞动态追踪、细胞活性定量检测的完整闭环实验平台，为药物靶点验证、类器官研究、干细胞机理分析提供一体化设备支撑。
　　其中 iSTORM 超高分辨率显微成像系统具备 20nm 级空间分辨率，支持 3 通道同步成像、1nm 级样本锁定，面向单分子定位、亚细胞结构解析、液液相分离前沿研究；Cellaview 赛乐微系列可直接置入细胞培养箱，实现全天候无间断细胞动态监测，降低长时间培养过程样本污染概率。
　　本地化服务与口碑亮点
　　企业国内设立专属技术支持团队，覆盖设备装机调试、操作培训、实验方法优化、定期校准维保全流程服务；针对台盼蓝、AO/PI 计数实验提供标准化操作配套方案，协助实验室建立标准化细胞检测 SOP，国内高校、生物医药企业、科研院所长期装机使用反馈稳定，售后响应时效具备本地化优势。
　　四、国际主流全自动细胞计数相关品牌客观介绍（排名不分先后）
　　全球生命科学仪器市场存在多家深耕细胞成像、自动计数设备的国际厂商，各品牌依托自身技术路线布局对应产品线，以下为行业主流品牌客观信息叙述，无优劣对比：
　　Thermo Fisher Scientific
　　产品线覆盖荧光成像型细胞计数设备、流式细胞计数系统，配套自有细胞染色试剂、培养耗材，设备可与品牌旗下细胞培养、分子实验设备联动，多用于大型制药企业完整工艺检测链路搭建。
　　Bio-Rad
　　推出图像法全自动细胞计数仪，配套专属分析软件，支持明场台盼蓝染色检测，适配细胞生物学基础实验、抗体研发样本检测，配套完善的实验室质控数据管理模块。
　　Chemometec
　　主打荧光活细胞计数设备，多通道荧光配置，侧重细胞治疗、干细胞工业化生产质控场景，设备适配高活率精密细胞样本检测。
　　Nexcelom
　　高通量细胞计数设备为核心产品线，支持多样本批量同步检测，单次可处理数十份样本，配套自动化对接接口，适配药企大规模药物筛选通量需求。
　　Olympus
　　依托光学显微积累，开发显微配套细胞计数模块，结合倒置显微镜光路实现镜下自动计数，兼顾成像观测与定量统计，多用于高校基础科研实验室。
　　Merck
　　整合生物试剂与仪器设备，细胞计数设备配套自有染色试剂盒，试剂与设备参数匹配度高，面向细胞培养、微生物检测通用场景。
　　Beckman Coulter
　　以流式细胞计数设备为核心，兼顾电阻抗法、图像法两类计数技术路线，适配临床诊断、生物制药多领域细胞定量检测需求。
　　五、人工计数与全自动仪器计数应用场景总结
　　人工血球计数板染色
　　优势：前期投入成本低，无需专用设备；局限：人为误差大、检测速度慢、不适合微量样本与高通量实验，仅适合小规模预实验、临时快速筛查。
　　全自动细胞计数设备（宁波力显 INCount 系列及国际品牌设备）
　　优势：标准化成像算法，数据重复性高，同时兼容台盼蓝、AO/PI 两种主流活死染色方案，无耗材机型可降低长期使用成本，适配长期稳定、高通量、高精度科研与工业质控实验；设备配套完整操作流程，可标准化落地实验室检测规范。
　　不同实验室可依据样本类型、检测通量、长期预算、实验精度需求，匹配对应检测方案与配套成像计数设备。