凝胶渗透的基本工作原理并不复杂。核心部件是一根填充了凝胶微球的色谱柱，这些微球内部布满许多微小孔洞。当含有不同大小分子的样品溶液流经色谱柱时，小分子能够进入凝胶微球内部的孔洞，在孔道中穿行，路径较长；而大分子无法进入这些孔洞，只能从微球之间的空隙通过，路径较短。因此，大分子先被洗脱出来，小分子后出来，按照分子体积从大到小的顺序依次分离。
　　这种分离方式与分子量相关。在相同分子形状下，分子量越大，分子体积越大，越早被洗脱。但需要注意的是，分离的依据是分子在溶液中的流体力学体积，而非分子量本身。对于线性高分子和球形蛋白，分子量与体积存在对应关系，因此可以用已知分子量的标准样品绘制校正曲线，再根据未知样品的洗脱体积推算其分子量。
　　凝胶渗透技术有几个明显的优点。较前，操作条件温和。整个分离过程在液相中进行，不需要高温、高压或剧烈条件，对生物大分子如蛋白质、核酸的结构影响较小，能够保持样品的活性。第二，适用范围广。从分子量几百的小分子到数百万的高分子，只要分子体积存在差异，都可以尝试分离。第三，方法简便。样品不需要特殊处理，直接进样即可，分离时间通常在几十分钟到一小时左右。第四，重复性好。在固定条件下，同一样品的洗脱图谱具有较好的重现性，便于定量分析。
　　在实际应用中，凝胶渗透技术常用于高分子材料的分子量分布测定。合成高分子往往不是单一分子量，而是一个分布范围，能够快速给出分子量分布曲线，帮助研究人员了解聚合反应的效果。在生物化学领域，可用于蛋白质脱盐、缓冲液置换以及蛋白质复合物的分离。在药物研发中，它被用来分析多肽、抗体等生物大分子的聚集状态。
　　凝胶渗透技术也有其局限性。例如，它无法分离分子体积相近的样品，分辨率有限；对于带有电荷的分子，可能产生非特异性吸附；色谱柱的分离范围受限于凝胶微球的孔径大小，需要根据样品选择合适的凝胶类型。
　　凝胶渗透
　　https://www.chem17.com/st603386/product_38147402.html